1:广州军区广州总医院

目的 研究人miR-155对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用,为miRNAs治疗乙型肝炎提供理论依据。方法 以HepG2.2.15细胞基因组为模板,PCR扩增人miR-155前体序列,双酶切连接到pmR-mCherry质粒,构建pmiR-155真核过表达载体,并转染到HepG2.2.15细胞。设重组组(pmiR-155质粒)、空载组(pmR-mCherry质粒)、转染试剂组和空白组。转染后24 h、48 h、72 h,应用实时荧光定量PCR法检测各组miR-155表达量和HBV DNA拷贝数,化学发光法定量检测HBs Ag和HBe Ag变化情况。结果 实时荧光定量PCR结果显示,与空白组相比,重组组miR-155表达量明显提高。化学发光法结果示在转染后48 h,过表达的miR-155对上清培养液所分泌HBs Ag、HBe Ag抑制作用明显,抑制率分别为(83.96±1.52)%和(79.60±8.71)%。定量PCR检测示过表达的miR-155对HBV DNA拷贝数的抑制率分别为(51.87±0.36)%、(43.67±1.51)%和(68.21±6.02)%。结论 miR-155对HBV蛋白的抑制作用具特异性,呈负相关,在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。

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目的 研究人miR-155对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用,为miRNAs治疗乙型肝炎提供理论依据。方法 以HepG2.2.15细胞基因组为模板,PCR扩增人miR-155前体序列,双酶切连接到pmR-mCherry质粒,构建pmiR-155真核过表达载体,并转染到HepG2.2.15细胞。设重组组(pmiR-155质粒)、空载组(pmR-mCherry质粒)、转染试剂组和空白组。转染后24 h、48 h、72 h,应用实时荧光定量PCR法检测各组miR-155表达量和HBV DNA拷贝数,化学发光法定量检测HBs Ag和HBe Ag变化情况。结果 实时荧光定量PCR结果显示,与空白组相比,重组组miR-155表达量明显提高。化学发光法结果示在转染后48 h,过表达的miR-155对上清培养液所分泌HBs Ag、HBe Ag抑制作用明显,抑制率分别为(83.96±1.52)%和(79.60±8.71)%。定量PCR检测示过表达的miR-155对HBV DNA拷贝数的抑制率分别为(51.87±0.36)%、(43.67±1.51)%和(68.21±6.02)%。结论 miR-155对HBV蛋白的抑制作用具特异性,呈负相关,在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。